Institusion
Institut Teknologi Bandung
Author
Khairunnisa Wira Rohmat, Riesa (STUDENT ID : 21115023)
(LECTURER ID : 0030096110)
Subject
Datestamp
0000-00-00 00:00:00
Abstract :
Industri perminyakan saat ini hanya dapat mengambil minyak bumi mentah
dengan efektivitas 20%-45% menggunakan metode primer dan sekunder.
Senyawa surfaktan yang dapat mencampurkan minyak dan air menjadi salah satu
alternatif yang dapat meningkatkan produksi minyak mentah hingga 200%.
Surfaktan yang ada saat ini bersifat toksik dan sulit didegradasi di alam, oleh
sebab itu dibutuhkan surfaktan yang bersifat biodegradable yang disebut
biosurfaktan. Biosurfaktan berbasis peptida dapat menjadi alternatif dan dapat
didisain reversible. Salah satu biosurfaktan yang sudah dibuat adalah SupeL00
yang didesain oleh LEMIGAS (Pusat Penelitian dan Pengembangan Teknologi
Minyak). Penelitian ini bertujuan untuk memproduksi, mempurifikasi, dan uji
aktivitas biosurfaktan SupeL00 peptida yang telah dikonstruk di penelitian
sebelumnya. Peptida dibuat dengan cara rekombinan dengan menggunakan vektor
pET 32b (+) yang telah disisipi gen SupeL00 diantara sekuen thioredoxin dan histag
dengan T7 sebagai promoter. Setelah konstruk ditransformasi ke dalam E. coli
BL21 (DE3), kemudian diinduksi dengan IPTG dengan konsentrasi akhir 1 mM.
Sel hasil induksi kemudian dilisis dengan menggunakan buffer lisis dan sonikasi
untuk diuji interfacial tension. Fusi protein dan SupeL00 dimodelkan struktur tiga
dimensinya. Fusi protein thioredoxin yang berada di ruang periplasmik, disekresi
menggunakan metode Osmotic Shock dengan sukrosa 20%. Hasil Fusi yang telah
disekresi keluar dari sel, kemudian dipotong dengan menggunakan TEV protease
pada suhu 4oC selama 16-18 jam. Fusi protein yang telah terpisah duji dengan oil
displacement dan phase behavior. Konstruksi gen SupeL00 pada plasmid ini
menghasilkan fusi protein thioredoksin, sisi pengenalan TEV protease, dan
peptida SupeL00 dengan ukuran protein ~14 kDa. Hasil pengukuran Interfacial
tension menunjukkan hasil yang bias karena buffer lisis menggunakan Triton-X
2% yang merupakan surfaktan dan hasil pemodelan menunjukkan SupeL00 harus
dipisahkan dari fusi protein agar dapat berfungsi. Pada osmotic release didapat
fusi protein yang lebih murni dan hasil pemisahan dengan TEV protease
memisahkan thiredoxin A (~11.8 kDa) dan Peptida SupeL00 (~2.8 kDa). Hasil uji
oil displacement memberikan nilai 2.67 untuk hasil pemisahan, nilai 0.27 untuk
thioredoxin sebagai kontrol negatif, dan 3.8 untuk kontrol postitif (tween 0.1%),
phase behavior menunjukkan adanya perbedaan kontak permukaan minyak dan
air. Dapat disimpulkan bahwa peptida SupeL00 memiliki aktivitas surfaktan
dalam intensitas yang rendah.